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[文獻精讀] 液體活檢的發(fā)祥地和試驗田

2017-08-28 00:00來源:原版作者:Jerry Li

從最初人們發(fā)現(xiàn)游離的腫瘤DNA, 到2010年后臨床概念的建立和檢測技術(shù)的成熟,液體活檢的發(fā)展實際上經(jīng)過了很漫長的過程。 液體活檢的發(fā)展在很大程度上得益于無創(chuàng)產(chǎn)檢領(lǐng)域的發(fā)展。 無創(chuàng)產(chǎn)檢(NIPT)由于其在理論和實踐上都和腫瘤的液體活檢很相似,被認為是液體活檢的一個分支。 從無創(chuàng)產(chǎn)檢在90年代末建立的那一刻開始, 就成為了液體活檢的發(fā)祥地和試驗田。

我們在上一期的《液體活檢通訊》中討論了用來研究和鑒定游離DNA的身份的兩個重要的模型系統(tǒng), 即凝血系統(tǒng)和創(chuàng)傷系統(tǒng)。 這兩個系統(tǒng)都是訊速變化的血液環(huán)境, 在這樣的環(huán)境里的游離DNA的消長情況不僅提供了游離DNA的生物學指標, 更為診斷患者的生理病理情況,比如創(chuàng)傷患者的預后, 提供了有力的依據(jù)。  這兩個系統(tǒng)都是同源系統(tǒng),即增生的游離DNA和本底的游離DNA來自同一供體。

實際上,從科學發(fā)現(xiàn)的角度看,同源系統(tǒng)對于液體活檢的科研來說是有很大難度的, 因為同源系統(tǒng)中增生和變化的DNA是很難追溯的。 相形之下, 異源系統(tǒng)中追溯DNA要容易得多。 最經(jīng)典的異源系統(tǒng)就是母體和嬰兒, 無創(chuàng)產(chǎn)檢就是用母體血樣來鑒定嬰兒基因。 在這個系統(tǒng)中,異源的游離DNA在高分辨率的分子診斷方法學下,可以清晰地判斷出來。



無創(chuàng)產(chǎn)檢后來居上,引領(lǐng)液體活檢

液體活檢的主流市場和終極目標,是通過游離DNA和游離細胞來完成對腫瘤的檢測。 在1996年發(fā)表在《自然醫(yī)學》的兩篇文章里, 美國和瑞士的兩個項目組分別獨立地構(gòu)建了檢測患者血液中的游離的腫瘤DNA的方法【1,2】。 其中的美國約翰霍普金斯大學的Sidransky項目組,他們研究了21頭頸癌患者的血清, 發(fā)現(xiàn)了其中6位患者有衛(wèi)星DNA的突變, 這些突變和實體瘤的癌突變是一致的,而這6位患者都發(fā)生了癌癥轉(zhuǎn)移。

幾乎在與此同時,瑞士的植物生化和生理實驗室的Anker項目組,用肺癌患者的血漿為樣本,發(fā)現(xiàn)了在大于70%的樣本里可以檢測到載有腫瘤突變的游離DNA。 這兩篇文章為建立當代液體活檢的方法學的提供了理論依據(jù)。從最初發(fā)現(xiàn)游離的腫瘤DNA3】到這時建立了初步的方法學,20年已經(jīng)過去了, 腫瘤的液體活檢終于有了顯著的進步,但是在展望的同時仍然有很多疑慮【4,5】。

1996年《自然醫(yī)學》的這兩篇關(guān)于游離腫瘤DNA文章發(fā)表后,啟發(fā)了香港中文大學的盧煜明教授。 盧教授當時剛剛建立了自己的獨立課題組,他抓住了這個機會,從而開啟了無創(chuàng)產(chǎn)檢的系統(tǒng)【6-8】。盧教授的邏輯也很明確, 嬰兒比腫瘤大多了,既然腫瘤的游離DNA可以檢測到,嬰兒的DNA就更能檢測到。

無創(chuàng)產(chǎn)檢領(lǐng)域的開創(chuàng)性文獻,是盧煜明于1997年在《柳葉刀》上發(fā)表的論文,闡述了在母體的血清和血漿中發(fā)現(xiàn)了嬰兒DNA9】。 這篇文章里他研究了30位懷有男嬰的孕婦, 用PCR擴增和檢測DNA, 發(fā)現(xiàn)其中的21位(70%)在她們的血樣里有Y染色體的DNA。 因為Y染色體是男性特征,只能來源于男嬰, 而在非懷孕婦女以及懷有女嬰的對照組樣品里沒有發(fā)現(xiàn)Y染色體DNA, 所以結(jié)論是母體血樣中有游離的嬰兒DNA, 這為無創(chuàng)產(chǎn)檢提供了理論依據(jù)。 這篇論文充分發(fā)揮了異源DNA系統(tǒng)的優(yōu)勢,大繁至簡, 用母體環(huán)境對照Y染色體這個直觀明了的追蹤系統(tǒng), 迅速找到了目標DNA。

無創(chuàng)產(chǎn)檢的系統(tǒng)和方法

無創(chuàng)產(chǎn)檢的主要臨床目標,是通過母體血清中的游離的嬰兒DNA來檢測是嬰兒的染色體異?!?/span>10-14】。 其中最常見的是對唐氏綜合征的無創(chuàng)檢測【15-20】。 唐氏綜合征(Down syndrome)又被稱為21三體綜合征(trisomy 21), 是最常見的嚴重出生缺陷病, 在美國有35萬唐氏綜合征的病人,而在全球范圍內(nèi)的唐氏的發(fā)病率和癥狀也都很相似。除了唐氏綜合征,還有其他的染色體異常, 包括13三體綜合征(trisomy 13, 又稱Patau Syndrome), 18三體綜合征(trisomy 18, 又稱Edward Syndrome),特納綜合征 (Turner Syndrome, 又稱45,X)和較為罕見的全套染色體三體綜合征(Triploidy)。

對于這些染色體遺傳病的無創(chuàng)檢測, 已經(jīng)有了相當?shù)呐R床病例積累【21-30】。 無創(chuàng)產(chǎn)檢的檢測方法主要是PCR和測序,包括大規(guī)模平行測序等二代測序方法【6-8, 31-33】。 從現(xiàn)有文獻提供的數(shù)據(jù)看, 無創(chuàng)產(chǎn)檢的系統(tǒng)和傳統(tǒng)方法相比, 除了風險的降低, 它的檢出率(DR, detection rate)和假陽性率(FPR, false positive rate)也明顯優(yōu)于傳統(tǒng)方法。 至此,無創(chuàng)產(chǎn)檢在安全性、靈敏度、特異性上全方位超越了傳統(tǒng)方法,已經(jīng)進入了臨床診療指南【34-35】,成為主流的檢測方法。基于無創(chuàng)產(chǎn)檢的檢測產(chǎn)品, 也陸續(xù)在法規(guī)上得到獲得批準。

除了對染色體異常的檢測, 無創(chuàng)產(chǎn)檢的還提供了更前沿的產(chǎn)檢項目, 包括全基因組分析、全轉(zhuǎn)錄組分析、全甲基化組分析、組織來源分析等【36-39】。 這些前沿的雖然還是停留在研發(fā)階段, 沒有進入法規(guī), 但也引領(lǐng)了未來的無創(chuàng)產(chǎn)檢以致整個液體活檢的方向。

產(chǎn)檢是有標準答案的平臺

無創(chuàng)產(chǎn)檢為開發(fā)液體活檢的方法和產(chǎn)品,提供了一個完美的平臺。 這個平臺的最大的優(yōu)勢,在于這個平臺能夠提供標準答案。

在無創(chuàng)方法之前, 產(chǎn)檢是通過羊水穿刺或絨毛檢查來完成, 用這些傳統(tǒng)方法來檢測染色體異常,是有完整的方法學和大量的臨床積累的【40-46】。 這些傳統(tǒng)方法為無創(chuàng)方法提供了參照系,提供了標準答案。 產(chǎn)檢的標準答案是體現(xiàn)在這個幾個方面。

第一,明確的時間表;

第二,清楚定義的檢測目標;

第三,異源系統(tǒng)。

無論是第一孕期還是第二孕期, 染色體異常的出現(xiàn)時機、概率、位點、游離DNA水平等, 都有明確的期待范圍【47-54】。 所以任何新的產(chǎn)檢方法, 包括已經(jīng)開發(fā)的無創(chuàng)檢測,還有未來的產(chǎn)檢方法, 只要和現(xiàn)有方法比對, 就可以計算出檢出率和假陽性率,相對準確地對新方法的優(yōu)劣做出鑒別。 相當來說,腫瘤的出現(xiàn)或者復發(fā),沒有明確的時間表, 突變位點眾多, 它是沒有標準答案的, 如果要計算出檢出率等參數(shù),其過程也更為復雜,這樣開發(fā)新檢測方法的成本和時間要求就更高。 作為異源系統(tǒng), 產(chǎn)檢提供了明確而簡便的異源系統(tǒng), 每一份嬰兒的DNA都有特征DNA(比如Y染色體DNA), 而腫瘤的高度異質(zhì)性和突變率決定了它作為異源系統(tǒng),是非常復雜的。 可以這樣認為,如果沒有無創(chuàng)產(chǎn)檢在近年的技術(shù)推動, 液體活檢領(lǐng)域到現(xiàn)在還只能是在黑暗中充滿希望地摸索著。

綜合地看, 無創(chuàng)產(chǎn)檢作為液體活檢的先行領(lǐng)域,開創(chuàng)了重要的概念和方法學, 對液體活檢的整個領(lǐng)域做出了非常積極的推動作用。 從市場規(guī)模和未來發(fā)展前景看,產(chǎn)檢只是液體活檢的一個很小的部分,但是它作為液體活檢的試驗田的在未來將持續(xù)發(fā)揮重要作用。


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