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首頁(yè) 專(zhuān)家論壇 標(biāo)本專(zhuān)家[文獻(xiàn)精讀] 液體活檢的發(fā)祥地和試驗(yàn)田
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[文獻(xiàn)精讀] 液體活檢的發(fā)祥地和試驗(yàn)田

2017-08-28 00:00來(lái)源:原版作者:Jerry Li

從最初人們發(fā)現(xiàn)游離的腫瘤DNA, 到2010年后臨床概念的建立和檢測(cè)技術(shù)的成熟,液體活檢的發(fā)展實(shí)際上經(jīng)過(guò)了很漫長(zhǎng)的過(guò)程。 液體活檢的發(fā)展在很大程度上得益于無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢領(lǐng)域的發(fā)展。 無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢(NIPT)由于其在理論和實(shí)踐上都和腫瘤的液體活檢很相似,被認(rèn)為是液體活檢的一個(gè)分支。 從無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢在90年代末建立的那一刻開(kāi)始, 就成為了液體活檢的發(fā)祥地和試驗(yàn)田。

我們?cè)谏弦黄诘摹兑后w活檢通訊》中討論了用來(lái)研究和鑒定游離DNA的身份的兩個(gè)重要的模型系統(tǒng), 即凝血系統(tǒng)和創(chuàng)傷系統(tǒng)。 這兩個(gè)系統(tǒng)都是訊速變化的血液環(huán)境, 在這樣的環(huán)境里的游離DNA的消長(zhǎng)情況不僅提供了游離DNA的生物學(xué)指標(biāo), 更為診斷患者的生理病理情況,比如創(chuàng)傷患者的預(yù)后, 提供了有力的依據(jù)。  這兩個(gè)系統(tǒng)都是同源系統(tǒng),即增生的游離DNA和本底的游離DNA來(lái)自同一供體。

實(shí)際上,從科學(xué)發(fā)現(xiàn)的角度看,同源系統(tǒng)對(duì)于液體活檢的科研來(lái)說(shuō)是有很大難度的, 因?yàn)橥聪到y(tǒng)中增生和變化的DNA是很難追溯的。 相形之下, 異源系統(tǒng)中追溯DNA要容易得多。 最經(jīng)典的異源系統(tǒng)就是母體和嬰兒, 無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢就是用母體血樣來(lái)鑒定嬰兒基因。 在這個(gè)系統(tǒng)中,異源的游離DNA在高分辨率的分子診斷方法學(xué)下,可以清晰地判斷出來(lái)。



無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢后來(lái)居上,引領(lǐng)液體活檢

液體活檢的主流市場(chǎng)和終極目標(biāo),是通過(guò)游離DNA和游離細(xì)胞來(lái)完成對(duì)腫瘤的檢測(cè)。 在1996年發(fā)表在《自然醫(yī)學(xué)》的兩篇文章里, 美國(guó)和瑞士的兩個(gè)項(xiàng)目組分別獨(dú)立地構(gòu)建了檢測(cè)患者血液中的游離的腫瘤DNA的方法【1,2】。 其中的美國(guó)約翰霍普金斯大學(xué)的Sidransky項(xiàng)目組,他們研究了21頭頸癌患者的血清, 發(fā)現(xiàn)了其中6位患者有衛(wèi)星DNA的突變, 這些突變和實(shí)體瘤的癌突變是一致的,而這6位患者都發(fā)生了癌癥轉(zhuǎn)移。

幾乎在與此同時(shí),瑞士的植物生化和生理實(shí)驗(yàn)室的Anker項(xiàng)目組,用肺癌患者的血漿為樣本,發(fā)現(xiàn)了在大于70%的樣本里可以檢測(cè)到載有腫瘤突變的游離DNA。 這兩篇文章為建立當(dāng)代液體活檢的方法學(xué)的提供了理論依據(jù)。從最初發(fā)現(xiàn)游離的腫瘤DNA3】到這時(shí)建立了初步的方法學(xué),20年已經(jīng)過(guò)去了, 腫瘤的液體活檢終于有了顯著的進(jìn)步,但是在展望的同時(shí)仍然有很多疑慮【4,5】。

1996年《自然醫(yī)學(xué)》的這兩篇關(guān)于游離腫瘤DNA文章發(fā)表后,啟發(fā)了香港中文大學(xué)的盧煜明教授。 盧教授當(dāng)時(shí)剛剛建立了自己的獨(dú)立課題組,他抓住了這個(gè)機(jī)會(huì),從而開(kāi)啟了無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢的系統(tǒng)【6-8】。盧教授的邏輯也很明確, 嬰兒比腫瘤大多了,既然腫瘤的游離DNA可以檢測(cè)到,嬰兒的DNA就更能檢測(cè)到。

無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢領(lǐng)域的開(kāi)創(chuàng)性文獻(xiàn),是盧煜明于1997年在《柳葉刀》上發(fā)表的論文,闡述了在母體的血清和血漿中發(fā)現(xiàn)了嬰兒DNA9】。 這篇文章里他研究了30位懷有男嬰的孕婦, 用PCR擴(kuò)增和檢測(cè)DNA, 發(fā)現(xiàn)其中的21位(70%)在她們的血樣里有Y染色體的DNA。 因?yàn)?/span>Y染色體是男性特征,只能來(lái)源于男嬰, 而在非懷孕婦女以及懷有女?huà)氲膶?duì)照組樣品里沒(méi)有發(fā)現(xiàn)Y染色體DNA, 所以結(jié)論是母體血樣中有游離的嬰兒DNA, 這為無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢提供了理論依據(jù)。 這篇論文充分發(fā)揮了異源DNA系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì),大繁至簡(jiǎn), 用母體環(huán)境對(duì)照Y染色體這個(gè)直觀(guān)明了的追蹤系統(tǒng), 迅速找到了目標(biāo)DNA。

無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢的系統(tǒng)和方法

無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢的主要臨床目標(biāo),是通過(guò)母體血清中的游離的嬰兒DNA來(lái)檢測(cè)是嬰兒的染色體異?!?/span>10-14】。 其中最常見(jiàn)的是對(duì)唐氏綜合征的無(wú)創(chuàng)檢測(cè)【15-20】。 唐氏綜合征(Down syndrome)又被稱(chēng)為21三體綜合征(trisomy 21), 是最常見(jiàn)的嚴(yán)重出生缺陷病, 在美國(guó)有35萬(wàn)唐氏綜合征的病人,而在全球范圍內(nèi)的唐氏的發(fā)病率和癥狀也都很相似。除了唐氏綜合征,還有其他的染色體異常, 包括13三體綜合征(trisomy 13, 又稱(chēng)Patau Syndrome), 18三體綜合征(trisomy 18, 又稱(chēng)Edward Syndrome),特納綜合征 (Turner Syndrome, 又稱(chēng)45,X)和較為罕見(jiàn)的全套染色體三體綜合征(Triploidy)。

對(duì)于這些染色體遺傳病的無(wú)創(chuàng)檢測(cè), 已經(jīng)有了相當(dāng)?shù)呐R床病例積累【21-30】。 無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢的檢測(cè)方法主要是PCR和測(cè)序,包括大規(guī)模平行測(cè)序等二代測(cè)序方法【6-8, 31-33】。 從現(xiàn)有文獻(xiàn)提供的數(shù)據(jù)看, 無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢的系統(tǒng)和傳統(tǒng)方法相比, 除了風(fēng)險(xiǎn)的降低, 它的檢出率(DR, detection rate)和假陽(yáng)性率(FPR, false positive rate)也明顯優(yōu)于傳統(tǒng)方法。 至此,無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢在安全性、靈敏度、特異性上全方位超越了傳統(tǒng)方法,已經(jīng)進(jìn)入了臨床診療指南【34-35】,成為主流的檢測(cè)方法。基于無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢的檢測(cè)產(chǎn)品, 也陸續(xù)在法規(guī)上得到獲得批準(zhǔn)。

除了對(duì)染色體異常的檢測(cè), 無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢的還提供了更前沿的產(chǎn)檢項(xiàng)目, 包括全基因組分析、全轉(zhuǎn)錄組分析、全甲基化組分析、組織來(lái)源分析等【36-39】。 這些前沿的雖然還是停留在研發(fā)階段, 沒(méi)有進(jìn)入法規(guī), 但也引領(lǐng)了未來(lái)的無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢以致整個(gè)液體活檢的方向。

產(chǎn)檢是有標(biāo)準(zhǔn)答案的平臺(tái)

無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢為開(kāi)發(fā)液體活檢的方法和產(chǎn)品,提供了一個(gè)完美的平臺(tái)。 這個(gè)平臺(tái)的最大的優(yōu)勢(shì),在于這個(gè)平臺(tái)能夠提供標(biāo)準(zhǔn)答案。

在無(wú)創(chuàng)方法之前, 產(chǎn)檢是通過(guò)羊水穿刺或絨毛檢查來(lái)完成, 用這些傳統(tǒng)方法來(lái)檢測(cè)染色體異常,是有完整的方法學(xué)和大量的臨床積累的【40-46】。 這些傳統(tǒng)方法為無(wú)創(chuàng)方法提供了參照系,提供了標(biāo)準(zhǔn)答案。 產(chǎn)檢的標(biāo)準(zhǔn)答案是體現(xiàn)在這個(gè)幾個(gè)方面。

第一,明確的時(shí)間表;

第二,清楚定義的檢測(cè)目標(biāo);

第三,異源系統(tǒng)。

無(wú)論是第一孕期還是第二孕期, 染色體異常的出現(xiàn)時(shí)機(jī)、概率、位點(diǎn)、游離DNA水平等, 都有明確的期待范圍【47-54】。 所以任何新的產(chǎn)檢方法, 包括已經(jīng)開(kāi)發(fā)的無(wú)創(chuàng)檢測(cè),還有未來(lái)的產(chǎn)檢方法, 只要和現(xiàn)有方法比對(duì), 就可以計(jì)算出檢出率和假陽(yáng)性率,相對(duì)準(zhǔn)確地對(duì)新方法的優(yōu)劣做出鑒別。 相當(dāng)來(lái)說(shuō),腫瘤的出現(xiàn)或者復(fù)發(fā),沒(méi)有明確的時(shí)間表, 突變位點(diǎn)眾多, 它是沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)答案的, 如果要計(jì)算出檢出率等參數(shù),其過(guò)程也更為復(fù)雜,這樣開(kāi)發(fā)新檢測(cè)方法的成本和時(shí)間要求就更高。 作為異源系統(tǒng), 產(chǎn)檢提供了明確而簡(jiǎn)便的異源系統(tǒng), 每一份嬰兒的DNA都有特征DNA(比如Y染色體DNA), 而腫瘤的高度異質(zhì)性和突變率決定了它作為異源系統(tǒng),是非常復(fù)雜的。 可以這樣認(rèn)為,如果沒(méi)有無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢在近年的技術(shù)推動(dòng), 液體活檢領(lǐng)域到現(xiàn)在還只能是在黑暗中充滿(mǎn)希望地摸索著。

綜合地看, 無(wú)創(chuàng)產(chǎn)檢作為液體活檢的先行領(lǐng)域,開(kāi)創(chuàng)了重要的概念和方法學(xué), 對(duì)液體活檢的整個(gè)領(lǐng)域做出了非常積極的推動(dòng)作用。 從市場(chǎng)規(guī)模和未來(lái)發(fā)展前景看,產(chǎn)檢只是液體活檢的一個(gè)很小的部分,但是它作為液體活檢的試驗(yàn)田的在未來(lái)將持續(xù)發(fā)揮重要作用。


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